高效液相色譜儀色譜柱的維護(hù)與保養(yǎng)
1.高效液相色譜的保養(yǎng)與使用注意事項(xiàng)
高效液相色譜柱是消耗品,因此盡可能地仔細(xì)使用會延長色譜柱的壽命。
1.1色譜柱使用前注意事項(xiàng)
色譜柱的儲存液無特殊說明均為評價報告所示的流動相。在使用前一定要注意色譜柱的儲存液與要分析樣品的流動相是否互溶。如胺基（NH?）氰基（CN）柱均為正相條件下評價, 所以如果使用條件為反相條件時, 請用一中介流動相（如異丙醇）。
先置換掉柱內(nèi)的儲存液, 然后再應(yīng)用反相條件對于C18固定相采用的是甲醇-水為評價流動相, 若要使用含鹽濃度較高的流動相, 使用前請用超純水或甲醇含量相對較低的甲醇-水頂替掉原來的評價流動相, 否則會對色譜柱造成極大的傷害, 將會明顯地減少色譜柱使用壽命。
1.2色譜的使用方向
高效液相色譜柱標(biāo)簽上的箭頭所示方向是評價時流動相流動的方向, 使用過程相流動的方向也最好按此方向。
1.3流動相
流動相中所用的各種有機(jī)溶劑要盡可能地使用色譜,或至是分析純試劑配流動相水最好是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動相再經(jīng)過 0.45或 0.22m的濾膜過濾一次則更好, 這一點(diǎn)對含鹽的流動相尤為重要。另外裝流動相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過濾器等裝置應(yīng)該定期清洗或更換。總之, 必須保證所使用的流動相和色譜系統(tǒng)是足夠的清潔。
1.4樣品
樣品也要盡可能的清潔, 同樣可選用樣品過濾器或樣品預(yù)處理（SPE柱）對樣品進(jìn)行預(yù)處理;若樣品不便處理, 要使用保護(hù)柱。 在用正相色譜法分析樣品時, 如無特殊要求, 所有的溶劑和樣品應(yīng)嚴(yán)格脫水。
1.5PH值
以常規(guī)硅膠為基質(zhì)的鍵合相填料高效液相色譜柱通常的PH值適用范圍是2.0-10.0。當(dāng)必須要在PH值適用范圍的邊界(特別是在8.0≦PH≦10.0時)條件下使用高效液相色譜柱時, 每次使用結(jié)束后立即用適合于色譜柱儲存并與所使用的流動相互溶的溶劑清洗, 并完全置換掉原來所使用的流動相。
2.色譜柱的保存
2.1在別無選擇的情況下,流動相的使用條件又非常劇烈時（如PH﹥10.0或PH﹤2.0）, 凡是以硅膠為基質(zhì)的色譜柱,關(guān)機(jī)前最好用適當(dāng)?shù)娜軇┤绯兯畬⒘鲃酉囗斕娉鲋?/span>, 然后方可短時間或過夜保存。
2.2如色譜柱要長時間保存,色譜柱必須存于合適的溶劑狀態(tài)下。對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙睛中,正相柱可以存于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中,離子交換柱可以儲存于水含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞中,并將購買新色譜柱時附送的防塵防干裂塑料堵頭堵上。 對使用過含鹽濃度較高的流動相的色譜柱,在儲存之前, 必須用超純水頂替掉原來的流動相后, 再儲存于合適的溶劑狀態(tài)下。儲存的溫度最好是室溫。
3.色譜柱的再生
因?yàn)楦咝б合嗌V柱是消耗品，隨著使用時間或進(jìn)樣次數(shù)的增加, 當(dāng)出現(xiàn)色譜峰高降低, 峰寬加大或出現(xiàn)肩峰時, 一般來說可能是柱效下降。
3.1反相柱的再生
采用以甲 醇:水=95:5（V:V）, 純甲醇, 二氯甲烷等溶劑作流動相, 順次沖洗,每種流動相流經(jīng)色譜柱的量為一倍色譜柱體積然后再以相反順序沖洗色譜柱。
3.2正相柱再生
順次以正己烷異丙醇二氯甲烷甲醇作流動相，沖洗色譜柱。每步注意平衡溶劑的順序，不要顛倒每種流動相流經(jīng)色譜柱的量為20-30倍柱體積。因異丙醇的粘度較大, 沖洗過程中請隨時注意調(diào)整沖洗的流速, 用甲醇沖洗完后, 再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必需嚴(yán)格脫水。
3.3離子交換柱的再生
長時間在高PH值和高離子強(qiáng)度緩沖溶液中使用, 將導(dǎo)致色譜柱離子交換能力降低。用稀酸緩沖溶液沖洗,可使陽離子柱再生。反之, 用稀堿緩沖溶液沖洗, 可使陰離子柱再生。
以上色譜柱的再生方法并不是絕對的標(biāo)準(zhǔn)方法,使用者可根據(jù)自己的實(shí)際經(jīng)驗(yàn)和目的,選擇合適的并能溶解柱內(nèi)污染物的溶劑作流動相,按正方向或反方向的沖洗。但是需要指出是, 無論采用什么方法再生色譜柱,均不可能完全恢復(fù)柱效或其他參數(shù)至新柱水平。
4.色譜柱在使用過程中易出現(xiàn)的問題和解決方法
高效液相色譜柱在使用過程中最容易碰到的問題就是柱壓升高。如果柱壓是在長時間使用過程中緩慢地增加, 通常這屬于正?，F(xiàn)象。但柱壓在使用過程中突然升高（系統(tǒng)管路堵塞除外）,可能的原因有如下幾點(diǎn)：
4.1色譜柱頭中過濾篩板 （圖1）中的2#部件污染
4.2色譜柱頭內(nèi)的填料被污染
4.3色譜柱內(nèi)緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機(jī)溶劑, 形成結(jié)晶析出
4.4流動相PH值過大或過小使固定相結(jié)構(gòu)破壞或溶解,解決方法如下:
4.4.1當(dāng)斷定是色譜柱頭中過濾篩板污染時,可將柱頭螺絲卸下, 取出過濾篩板, 并將其放置在30%左右的稀硝酸內(nèi),用超聲波超聲清洗約10分鐘后,再用超純水超聲約10分鐘, 重新裝人色譜柱內(nèi)
4.4.2當(dāng)斷定是色譜柱頭內(nèi)的填料被污染時,可將柱頭螺絲卸下用專用小匙挖出柱內(nèi)前段被污染的填料, 用相同的柱填料重新填人,仔細(xì)修復(fù)后重新安裝上柱頭螺絲,或以能溶解污染物的流動相,按色譜柱使用的相反方向,沖洗色譜柱（流動相的沖洗量為20至30倍色譜柱體積或視具體情況而定）。另外,此時最好不要連接檢測器, 將污染物沖出色譜柱, 再按色譜柱標(biāo)明的箭頭方向使用色譜柱上箭頭方向說明色譜評價是按此方向價。 因此使用時最好按此方向價。
4.4.3當(dāng)斷定是鹽結(jié)晶時,用水沖洗色譜柱,使柱內(nèi)鹽全部溶解并被沖洗出色譜柱, 再換用含高濃度甲醇或其他有機(jī)溶劑的流動相
4.4.4如果是因使用的流動相PH值控制不當(dāng),通常很難將色譜柱恢復(fù)。 有一點(diǎn)必須注意一旦色譜柱頭被打開, 即便是經(jīng)過很仔細(xì)地修復(fù)都很難恢復(fù)到原有新柱水平。
綜上所述,高效液相色譜柱的使用涉及到了大量機(jī)械化學(xué)知識和應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)。因此,使用者可以根據(jù)自己實(shí)際情況加以總結(jié),不斷提高色譜儀的使用壽命。
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