高效液相色譜（1）-Agilent 1290 超高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程
Ⅰ 目的：制定Agilent 1290超高效液相色譜儀使用操作規(guī)程，確保操作人員能正確規(guī)范地操作液相色譜儀。
Ⅱ 范圍：適用于Agilent1290超高效液相色譜儀的使用。
Ⅲ 規(guī)程：
1 開(kāi)機(jī)
1.1 打開(kāi)計(jì)算機(jī)，進(jìn)入 Windows畫面。
1.2 打開(kāi) 1290INFINITY HPLC 各模塊電源。
1.3 待各模塊自檢完成后，雙擊“Instrument 1 Online”圖標(biāo)，化學(xué)工作站自動(dòng)與12001290INFINITY HPLC 通訊。
1.4 從“View”菜單中選擇“方法和運(yùn)行控制”畫面， 點(diǎn)擊”視圖”菜單中的“樣品視圖“系統(tǒng)視圖”， 使其命令前有“√”標(biāo)志，來(lái)調(diào)用所需的界面。
1.5 點(diǎn)擊泵下面的瓶圖標(biāo)，選擇‘瓶填充‘如下圖所示，輸入溶劑的實(shí)際體積和瓶體積。 也可輸入停泵的體積。點(diǎn)擊“Ok”。
1.6 從菜單 “視圖”中，選中“在線信號(hào)”，選中“信號(hào)窗口 1”，然后點(diǎn)擊“改變…” 鈕，將所要繪圖的信號(hào)移到右邊的框中，點(diǎn)擊“確定”。(如同時(shí)檢測(cè)二個(gè)信號(hào)，則重復(fù)選中“信號(hào)窗口 2”)
2 排氣
2.1 首先在方法編輯中，泵的參數(shù)設(shè)置部分，選好需要排空的通道（保證是開(kāi)的）
2.2 點(diǎn)擊儀器狀態(tài)視圖中泵的圖標(biāo)，選擇控制，出現(xiàn)如下圖
2.3 勾上吹掃，并且輸入流速，時(shí)間，比例就可以 purge 泵頭。排空的時(shí)候閥會(huì)自動(dòng)切換，無(wú)需人為介入。
2.4 當(dāng)我們發(fā)現(xiàn)泵頭里面有氣泡出不來(lái)的時(shí)候，選擇預(yù)備---開(kāi)。然后點(diǎn)擊確定。此時(shí)泵會(huì)用很強(qiáng)烈的方式朝外泵液體，并持續(xù) 20 次自動(dòng)停止。
3 編輯數(shù)據(jù)采集方法
3.1 開(kāi)始編輯完整方法：
從“方法”菜單中選擇“編輯完整方法…” 項(xiàng)，如下圖所示選中除“數(shù)據(jù)分析 ”外的三項(xiàng)，點(diǎn)擊“確定” ，進(jìn)入下一畫面。
3.2 方法信息：
在“方法注釋”中加入方法的信息（如：This is for test!） 。 點(diǎn)擊 “確定” ， 進(jìn)入下一畫面。
3.3 進(jìn)樣方式選擇
根據(jù)自動(dòng)進(jìn)樣器的類型，選擇合適的進(jìn)樣方式。
3.4 泵參數(shù)設(shè)定：
在“流速”處輸入流量，如 1.5ml/min，停止時(shí)間：10 min。在“溶劑B”處輸入 70.0，(A=100-B) ，也可“插入 ”一行“時(shí)間表” ，編輯梯度。在“壓力限”處輸入柱子的最大耐高壓，以保護(hù)柱子。
3.5 自動(dòng)進(jìn)樣器參數(shù)設(shè)定:
選擇合適的進(jìn)樣方式， 如圖所示，進(jìn)樣體積 1.0ul ，標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)樣”----只能輸入進(jìn)樣體積，此方式無(wú)洗針功能。 “洗針進(jìn)樣”----可以輸入進(jìn)樣體積和洗瓶位置，此方式針從樣品瓶抽完樣品后，會(huì)在針座旁邊中洗針。
3.6 柱溫箱參數(shù)設(shè)定:
在“溫度”下面的空白方框內(nèi)輸入所需溫度，如：40度。并選中它，點(diǎn)擊“更多信息>>” 鍵，如圖所示，選中“與左側(cè)相同”，使柱溫箱的溫度左右一致。
3.7 DAD檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定:
檢測(cè)波長(zhǎng): 254nm，帶寬=4nm， 參比波長(zhǎng)=360nm，帶寬=100nm;
檢測(cè)波長(zhǎng)：一般選擇最大吸收處的波長(zhǎng)。樣品帶寬： 一般選擇最大吸收值一半處的整個(gè)寬度。參比波長(zhǎng)：一般選擇在靠近樣品信號(hào)的無(wú)吸收或低吸收區(qū)域 。 參比帶寬： 至少要與樣品信號(hào)的帶寬相等， 許多情況下用100nm作為缺省值。峰寬（響應(yīng)時(shí)間） ：其值盡可能接近要測(cè)的窄峰峰寬。狹縫-狹縫窄，光譜分辨率高；寬時(shí)，噪音低。同時(shí)可以輸入采集光譜方式，步長(zhǎng)，范圍，閾值。選中所用的燈。 可以開(kāi)啟光學(xué)單元溫度控制;可以設(shè)定8通道信號(hào)等。
3.8 FLD 檢測(cè)器參數(shù)設(shè)定:
色譜條件：
響應(yīng)時(shí)間=4s. 停止時(shí)間： 4min。
激發(fā)波長(zhǎng):200-700nm，步長(zhǎng)為 1nm，或零級(jí)。
發(fā)射波長(zhǎng): 280-900nm， 步長(zhǎng)為 1nm，或零級(jí)。
PMT:多數(shù)應(yīng)用適當(dāng)?shù)脑O(shè)定值為 10，若高濃度樣品峰被切平頭，則減少 PMT 值。
“峰寬”：大多數(shù)應(yīng)用設(shè)為 4s，只有快速分析采用小的設(shè)定值。
多波長(zhǎng)及光譜（激發(fā)） 。 多波長(zhǎng)及光譜（發(fā)射） 。
同時(shí)可以輸入范圍、步長(zhǎng)、采集光譜。
點(diǎn)擊“確定”進(jìn)入下一畫面。
3.9 運(yùn)行時(shí)選項(xiàng)表
在“ 運(yùn)行時(shí)選項(xiàng)表 ”中，選中“ 數(shù)據(jù)采集” ，點(diǎn)擊“確定” 。
3.10 保存方法
從“方法”菜單，選中“方法另存為…” ，輸入一方法名，如“測(cè)試” ，點(diǎn)擊“確定。
4 單次樣品運(yùn)行
從“運(yùn)行控制”菜單中，選擇“樣品信息”選項(xiàng)，如下圖所示，輸入操作者名稱，如“安裝工程師” ；在“數(shù)據(jù)文件 ”中選擇“手動(dòng)”或“前綴/計(jì)數(shù)器” 。
點(diǎn)擊“確定”，從“系統(tǒng)視圖 菜單啟動(dòng)系統(tǒng)。
等儀器準(zhǔn)備好，基線平穩(wěn)，從“運(yùn)行控制”菜單中選擇“運(yùn)行方法” ，進(jìn)樣。(若無(wú)自動(dòng)樣器，則基線平穩(wěn)后，進(jìn)樣并搬動(dòng)手動(dòng)進(jìn)樣閥，啟動(dòng)運(yùn)行。)
5 面積百分比數(shù)據(jù)處理
5.1 選擇界面
從“視圖”菜單中，點(diǎn)擊“數(shù)據(jù)分析”進(jìn)入數(shù)據(jù)分析畫面。
5.2 調(diào)用信號(hào)
從“文件”菜單選擇“調(diào)用信號(hào)” ，選中您的數(shù)據(jù)文件名，如下圖所示。點(diǎn)擊“ 確定” ，則數(shù)據(jù)被調(diào)出。
5.3 做譜圖優(yōu)化：
從“圖形”菜單中選擇“信號(hào)選項(xiàng)” ，如下圖所示。從“范圍” 中選擇“滿量程” 或“自動(dòng)量程” 及合適的時(shí)間范圍或選擇“自定義量程” 調(diào)整。反復(fù)進(jìn)行，直到圖的比例合適為止。點(diǎn)擊“ 確定” 。
5.4 積分優(yōu)化:
從“積分”菜單中選擇“積分事件”選項(xiàng)，如下圖所示。選擇合適的“斜率靈敏度” ， “峰寬” ， “最小峰面積” ， “最小峰高” 。
從“積分”菜單中選擇“積分”選項(xiàng)， 則數(shù)據(jù)被積分。
如積分結(jié)果不理想，則修改相應(yīng)的積分參數(shù)，直到滿意為止。
點(diǎn)擊左邊“√”圖標(biāo)，將積分參數(shù)存入方法。
5.5 打印報(bào)告:
從“報(bào)告”菜單中選擇“設(shè)定報(bào)告”選項(xiàng)，進(jìn)入如下圖所示畫面。
點(diǎn)擊“定量結(jié)果”框中“計(jì)算”右側(cè)的黑三角，選中“面積百分比” ，其它選項(xiàng)不變。 點(diǎn)擊“ 確定” 。
從“報(bào)告”菜單中選擇“打印報(bào)告” ，則報(bào)告結(jié)果將打印到屏幕上，如想輸出到打印機(jī)上，則點(diǎn)擊“報(bào)告” 底部的“打印”鈕。
6 關(guān)機(jī)
關(guān)機(jī)前，先關(guān)燈，用相應(yīng)的溶劑充分沖洗系統(tǒng)。
退出化學(xué)工作站，依提示關(guān)泵，及其它窗口，關(guān)閉計(jì)算機(jī)（用 shut down 關(guān)） 。
關(guān)閉 Agilent 1290 各模塊電源開(kāi)關(guān)。
7 定量數(shù)據(jù)處理
7.1 點(diǎn)擊“方法”菜單，選擇“調(diào)用方法L..”，在方法目錄中選擇要進(jìn)行定量設(shè)定的方法，該方法是經(jīng)過(guò)積分和譜圖優(yōu)化過(guò)的方法。點(diǎn)擊“確定”，則選擇的方法被調(diào)出。
7.2 從“文件”菜單中選擇“調(diào)用信號(hào)…”選項(xiàng)， 選中標(biāo)樣的數(shù)據(jù)文件名， 點(diǎn)擊 “確定”，則數(shù)據(jù)被調(diào)出。檢查確認(rèn)積分和譜圖優(yōu)化的參數(shù)是否合適。
7.3 從“校正”菜單中選擇，“新建校正表”按鈕，進(jìn)入以下畫面， 確認(rèn)選項(xiàng)在“自動(dòng)設(shè)定”；級(jí)別為“1”，點(diǎn)擊“確定”。若要信號(hào)單獨(dú)計(jì)算，則選擇前面的空白框。
7.4 在覆蓋現(xiàn)有校準(zhǔn)表中對(duì)話框中，選擇“是（Y）”。若方法中沒(méi)有舊的校準(zhǔn)表，無(wú)此項(xiàng)。
7.5 則所有積過(guò)分的峰，其保留時(shí)間、峰面積按序顯示在校準(zhǔn)表中。如圖所示，依次輸入化合物的名稱、含量，校準(zhǔn)曲線顯示在右下方?？梢栽O(shè)定參考峰等。若用內(nèi)標(biāo)方法定量，還須選擇內(nèi)標(biāo)，點(diǎn)擊“內(nèi)標(biāo)“下的區(qū)域，選擇那個(gè)峰作為內(nèi)標(biāo)峰，指定每個(gè)色譜峰以那個(gè)內(nèi)標(biāo)為參比。點(diǎn)擊“確定”。
7.6 在刪除含量為零的行對(duì)話框中選擇“是（Y）”。則校準(zhǔn)表中未輸入含量的峰從表中刪除。
7.7 點(diǎn)擊“校準(zhǔn)”菜單，選擇“校準(zhǔn)設(shè)置”按鈕，進(jìn)入以下畫面，輸入單位：如“%”；其它項(xiàng)不變。點(diǎn)擊“確定”。
7.8 打印報(bào)告:
從“報(bào)告”菜單中選擇“ 指定報(bào)告…”選項(xiàng)。點(diǎn)擊“定量結(jié)果”框中“定量”右側(cè)的黑三角，選中“外標(biāo)法”，其它選項(xiàng)不變。點(diǎn)擊“確定”。----若是用內(nèi)標(biāo)法定量，則選“內(nèi)標(biāo)法”。
從“報(bào)告”菜單中選擇“打印報(bào)告“，則報(bào)告結(jié)果將打印到屏幕上，如想輸出到打印機(jī)上，則點(diǎn)擊“報(bào)告“ 底部的“打印”鈕。---可以選擇打印到文件中，如PDF格式。
7.9 若有多個(gè)濃度標(biāo)樣，則依次調(diào)出校準(zhǔn)數(shù)據(jù)，調(diào)出每一個(gè)校準(zhǔn)數(shù)據(jù)后，點(diǎn)擊“校準(zhǔn)”菜單，選擇“添加級(jí)別“，第2級(jí)數(shù)入”2“，類推。 在校準(zhǔn)表中輸入每級(jí)的組份濃度。
7.10 在方法菜單中，選擇“運(yùn)行時(shí)選項(xiàng)表”，確認(rèn)“數(shù)據(jù)分析選項(xiàng)”也被選中，點(diǎn)擊“確定”。點(diǎn)擊“保存”按鈕，存儲(chǔ)修改的方法。此方法包含校準(zhǔn)表，建立完畢。
來(lái)源|本文原創(chuàng)、儀器無(wú)憂網(wǎng)根據(jù)專業(yè)書籍以及網(wǎng)絡(luò)資料編輯創(chuàng)作、轉(zhuǎn)載需聯(lián)系我們授權(quán)
