高效液相色譜儀色譜柱的維護(hù)與保養(yǎng)
1.高效液相色譜的保養(yǎng)與使用注意事項(xiàng)
高效液相色譜柱是消耗品,因此盡可能地仔細(xì)使用會(huì)延長色譜柱的壽命。
1.1色譜柱使用前注意事項(xiàng)
色譜柱的儲(chǔ)存液無特殊說明均為評價(jià)報(bào)告所示的流動(dòng)相。在使用前一定要注意色譜柱的儲(chǔ)存液與要分析樣品的流動(dòng)相是否互溶。如胺基（NH?）氰基（CN）柱均為正相條件下評價(jià), 所以如果使用條件為反相條件時(shí), 請用一中介流動(dòng)相（如異丙醇）。
先置換掉柱內(nèi)的儲(chǔ)存液, 然后再應(yīng)用反相條件對于C18固定相采用的是甲醇-水為評價(jià)流動(dòng)相, 若要使用含鹽濃度較高的流動(dòng)相, 使用前請用超純水或甲醇含量相對較低的甲醇-水頂替掉原來的評價(jià)流動(dòng)相, 否則會(huì)對色譜柱造成極大的傷害, 將會(huì)明顯地減少色譜柱使用壽命。
1.2色譜的使用方向
高效液相色譜柱標(biāo)簽上的箭頭所示方向是評價(jià)時(shí)流動(dòng)相流動(dòng)的方向, 使用過程相流動(dòng)的方向也最好按此方向。
1.3流動(dòng)相
流動(dòng)相中所用的各種有機(jī)溶劑要盡可能地使用色譜,或至是分析純試劑配流動(dòng)相水最好是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動(dòng)相再經(jīng)過 0.45或 0.22m的濾膜過濾一次則更好, 這一點(diǎn)對含鹽的流動(dòng)相尤為重要。另外裝流動(dòng)相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線過濾器等裝置應(yīng)該定期清洗或更換。總之, 必須保證所使用的流動(dòng)相和色譜系統(tǒng)是足夠的清潔。
1.4樣品
樣品也要盡可能的清潔, 同樣可選用樣品過濾器或樣品預(yù)處理（SPE柱）對樣品進(jìn)行預(yù)處理;若樣品不便處理, 要使用保護(hù)柱。 在用正相色譜法分析樣品時(shí), 如無特殊要求, 所有的溶劑和樣品應(yīng)嚴(yán)格脫水。
1.5PH值
以常規(guī)硅膠為基質(zhì)的鍵合相填料高效液相色譜柱通常的PH值適用范圍是2.0-10.0。當(dāng)必須要在PH值適用范圍的邊界(特別是在8.0≦PH≦10.0時(shí))條件下使用高效液相色譜柱時(shí), 每次使用結(jié)束后立即用適合于色譜柱儲(chǔ)存并與所使用的流動(dòng)相互溶的溶劑清洗, 并完全置換掉原來所使用的流動(dòng)相。
2.色譜柱的保存
2.1在別無選擇的情況下,流動(dòng)相的使用條件又非常劇烈時(shí)（如PH﹥10.0或PH﹤2.0）, 凡是以硅膠為基質(zhì)的色譜柱,關(guān)機(jī)前最好用適當(dāng)?shù)娜軇┤绯兯畬⒘鲃?dòng)相頂替出柱, 然后方可短時(shí)間或過夜保存。
2.2如色譜柱要長時(shí)間保存,色譜柱必須存于合適的溶劑狀態(tài)下。對于反相柱可以儲(chǔ)存于純甲醇或乙睛中,正相柱可以存于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中,離子交換柱可以儲(chǔ)存于水含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞中,并將購買新色譜柱時(shí)附送的防塵防干裂塑料堵頭堵上。 對使用過含鹽濃度較高的流動(dòng)相的色譜柱,在儲(chǔ)存之前, 必須用超純水頂替掉原來的流動(dòng)相后, 再儲(chǔ)存于合適的溶劑狀態(tài)下。儲(chǔ)存的溫度最好是室溫。
3.色譜柱的再生
因?yàn)楦咝б合嗌V柱是消耗品，隨著使用時(shí)間或進(jìn)樣次數(shù)的增加, 當(dāng)出現(xiàn)色譜峰高降低, 峰寬加大或出現(xiàn)肩峰時(shí), 一般來說可能是柱效下降。
3.1反相柱的再生
采用以甲 醇:水=95:5（V:V）, 純甲醇, 二氯甲烷等溶劑作流動(dòng)相, 順次沖洗,每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱的量為一倍色譜柱體積然后再以相反順序沖洗色譜柱。
3.2正相柱再生
順次以正己烷異丙醇二氯甲烷甲醇作流動(dòng)相，沖洗色譜柱。每步注意平衡溶劑的順序，不要顛倒每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱的量為20-30倍柱體積。因異丙醇的粘度較大, 沖洗過程中請隨時(shí)注意調(diào)整沖洗的流速, 用甲醇沖洗完后, 再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必需嚴(yán)格脫水。
3.3離子交換柱的再生
長時(shí)間在高PH值和高離子強(qiáng)度緩沖溶液中使用, 將導(dǎo)致色譜柱離子交換能力降低。用稀酸緩沖溶液沖洗,可使陽離子柱再生。反之, 用稀堿緩沖溶液沖洗, 可使陰離子柱再生。
以上色譜柱的再生方法并不是絕對的標(biāo)準(zhǔn)方法,使用者可根據(jù)自己的實(shí)際經(jīng)驗(yàn)和目的,選擇合適的并能溶解柱內(nèi)污染物的溶劑作流動(dòng)相,按正方向或反方向的沖洗。但是需要指出是, 無論采用什么方法再生色譜柱,均不可能完全恢復(fù)柱效或其他參數(shù)至新柱水平。
4.色譜柱在使用過程中易出現(xiàn)的問題和解決方法
高效液相色譜柱在使用過程中最容易碰到的問題就是柱壓升高。如果柱壓是在長時(shí)間使用過程中緩慢地增加, 通常這屬于正?，F(xiàn)象。但柱壓在使用過程中突然升高（系統(tǒng)管路堵塞除外）,可能的原因有如下幾點(diǎn)：
4.1色譜柱頭中過濾篩板 （圖1）中的2#部件污染
4.2色譜柱頭內(nèi)的填料被污染
4.3色譜柱內(nèi)緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機(jī)溶劑, 形成結(jié)晶析出
4.4流動(dòng)相PH值過大或過小使固定相結(jié)構(gòu)破壞或溶解,解決方法如下:
4.4.1當(dāng)斷定是色譜柱頭中過濾篩板污染時(shí),可將柱頭螺絲卸下, 取出過濾篩板, 并將其放置在30%左右的稀硝酸內(nèi),用超聲波超聲清洗約10分鐘后,再用超純水超聲約10分鐘, 重新裝人色譜柱內(nèi)
4.4.2當(dāng)斷定是色譜柱頭內(nèi)的填料被污染時(shí),可將柱頭螺絲卸下用專用小匙挖出柱內(nèi)前段被污染的填料, 用相同的柱填料重新填人,仔細(xì)修復(fù)后重新安裝上柱頭螺絲,或以能溶解污染物的流動(dòng)相,按色譜柱使用的相反方向,沖洗色譜柱（流動(dòng)相的沖洗量為20至30倍色譜柱體積或視具體情況而定）。另外,此時(shí)最好不要連接檢測器, 將污染物沖出色譜柱, 再按色譜柱標(biāo)明的箭頭方向使用色譜柱上箭頭方向說明色譜評價(jià)是按此方向價(jià)。 因此使用時(shí)最好按此方向價(jià)。
4.4.3當(dāng)斷定是鹽結(jié)晶時(shí),用水沖洗色譜柱,使柱內(nèi)鹽全部溶解并被沖洗出色譜柱, 再換用含高濃度甲醇或其他有機(jī)溶劑的流動(dòng)相
4.4.4如果是因使用的流動(dòng)相PH值控制不當(dāng),通常很難將色譜柱恢復(fù)。 有一點(diǎn)必須注意一旦色譜柱頭被打開, 即便是經(jīng)過很仔細(xì)地修復(fù)都很難恢復(fù)到原有新柱水平。
綜上所述,高效液相色譜柱的使用涉及到了大量機(jī)械化學(xué)知識(shí)和應(yīng)用經(jīng)驗(yàn)。因此,使用者可以根據(jù)自己實(shí)際情況加以總結(jié),不斷提高色譜儀的使用壽命。
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