【行業(yè)新聞】新冠病毒是這樣被P3實驗室檢測出來的
在廣東省第二人民醫(yī)院P3實驗室標本處理間內(nèi)，研討人員正進行開蓋加樣和核酸提取。
核酸檢測是確診新冠肺炎的“金標準”，而檢測流程中的每一個環(huán)節(jié)都是精細活，容不得半點粗心。
“這兒是與病毒‘零距離’接觸的當?shù)兀麄€實驗室完全密封，室內(nèi)處于負壓狀況，我們喜愛用‘三流’來描述它，即人流、物流、氣流的單向活動，確保在里面的污染物不會泄露到外面而造成污染?！睆V東省第二人民醫(yī)院P3實驗室主任林劍國說。而他說的“這兒”指的就是P3實驗室（生物安全防護三級實驗室）。廣東省第二人民醫(yī)院每天400多份新冠病毒核酸檢測就是在這兒展開的。
現(xiàn)在，讓我們揭開廣東省第二人民醫(yī)院P3實驗室的奧秘面紗，看看在這兒病毒究竟是怎樣被“揪出來”的？
檢測流程每個環(huán)節(jié)都是精細活
核酸檢測是確診新冠肺炎的“金標準”，而檢測流程中的每一個環(huán)節(jié)都是精細活，容不得半點粗心。
實驗室內(nèi)的檢測流程可分為5個過程：樣本進入“傳遞窗”—滅活處理—開蓋加樣和核酸提取—擴增反應判別效果—高壓滅菌。
第一步，搜集的檢測樣本如咽拭子或肛拭子，在進入P3實驗室前就得先進入一個特別的窗口——“傳遞窗”，這個窗口也叫Air Lock，空氣鎖，望文生義，與空氣有關(guān)。這個傳遞窗有不能一同翻開的兩層門，確保傳遞樣本時帶進去的空氣被阻隔在兩層門中，確保實驗室外的環(huán)境不受污染。這也是“三流”中“物流”，樣本從這兒敞開了其在實驗室中短暫的終身。
第二步，樣本在水浴箱經(jīng)半個小時56℃的高溫滅活，使病毒蛋白不再有生理活性，失掉感染、致病和繁殖能力，使實驗員在對樣本進行檢測時相對安全，但是病毒蛋白的基因序列并沒有受到影響。
第三步，進行開蓋加樣和核酸提取。
第四步，提取的核酸送到核酸檢測室內(nèi)，就要上儀器了。提取的核酸參加擴增試劑中，經(jīng)過熒光PCR儀進行RT-PCR反應，先將提取的核酸回轉(zhuǎn)錄成DNA，再以DNA為模版，對特定位點進行擴增，使用不同的溫度進行變性、退火和延伸，每個循環(huán)搜集熒光值，45個循環(huán)后制作熒光曲線，用時約110分鐘，實驗員根據(jù)熒光曲線剖析判別效果的陰性和陽性。
第五步，實驗進程發(fā)生的污物經(jīng)過高壓滅菌后，按相關(guān)普通醫(yī)療垃圾處理?！拔锪鳌痹谶@兒就完畢了。
檢測效果履歷重重比對與復核
任何一個環(huán)節(jié)呈現(xiàn)問題都或許導致檢測效果過失。因而，為確保檢測的質(zhì)量，檢測效果將履歷重重的比對與復核。
據(jù)介紹，檢測質(zhì)量的確保辦法在檢測前就現(xiàn)已開始了，樣本搜集的醫(yī)務人員有必要經(jīng)過嚴峻的練習和考核才華上崗，樣本的質(zhì)量與搜集的技術(shù)密切相關(guān)，每個動作流程都有必要按規(guī)定進行，樣本搜集完成后的護送作業(yè)也需依照緊密的程序，由專人專道配送到實驗室。
在檢測進程中，實驗員始終保持慎重的情緒進行每一次檢驗，不失去任何一個可疑樣本，針對可疑樣本，還會選用不同的試劑進行復核確認；其次，依照流程，每進行一批實驗，均會隨機刺進三個以上空白對照，針對陽性樣本還會進行病毒基因的測序比對，以避免“假陽性”的呈現(xiàn)。
檢測后，實驗室還會定時隨機抽取檢測樣本送到第三方實驗室進行檢測，對數(shù)據(jù)進行比照剖析，一同實驗室也會參加衛(wèi)生主管部門和廣東省臨床中心的室間質(zhì)評，確保檢測的準確性。
病毒“偵察兵”業(yè)務過硬又勇敢
在操作中，實驗員面臨眼前的樣本，需求“一個一個地揭開蓋子，進行開蓋加樣和核酸提取”，這無疑是與病毒的正面交鋒。核酸檢測的主旨是高效、有序和安全。其中安全是重中之重，尤其是實驗員的安全。
因而實驗員要進入P3實驗室，首要應在清潔區(qū)內(nèi)穿戴中級防護服，經(jīng)過緩沖間進入實驗室負壓作業(yè)間，在這兒進行標本處理，核酸提取及檢測，完畢后進行空間、外表消毒，再按次序脫下防護服，經(jīng)過淋浴間更衣后，回到清潔區(qū)。這些過程有必要嚴峻履行，一個都不能少。
廣東省第二人民醫(yī)院P3實驗室檢測團隊現(xiàn)在有21人，施行一天三班制。在疫情爆發(fā)階段，為了滿意檢測需求，縮短檢測時間，實驗室又在原有團隊基礎(chǔ)上，從風濕免疫科、血液科等科室的實驗室調(diào)配了人員。這些病毒“偵察兵”70%以上是碩士以上學歷，均經(jīng)過分子生物學的練習，并具有多聚酶鏈反應（PCR）上崗證。
實驗室嚴峻遵循“新式冠狀病毒肺炎醫(yī)治方案”及生物安全要求，檢測人員需在P3實驗室負壓密閉的空間里穿戴三級防護配備，5個小時不吃不喝，甚至穿戴成人紙尿褲以處理上廁所的問題，隨時需求面臨因負壓差及配備緊密導致的頭暈、吐逆等癥狀。
“與戰(zhàn)爭在病房里的醫(yī)護人員不同，他們藏在實驗室里，每天與病毒近距離接觸，是人們看不見的‘最前哨’?！绷謩f。
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生物安全防護實驗室分幾級
生物安全防護實驗室是指實驗室的結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備可以確保作業(yè)人員在處理含有致病微生物及其毒素時，不受實驗目標侵染，并確保周圍環(huán)境不受污染。
根據(jù)所處理微生物及其毒素的危害程度不同，生物安全防護實驗室分為四級，一級最低，四級最高。生物安全防護一級實驗室一般適用于對健康成年人無致病效果的微生物；二級適用于對人和環(huán)境有中等潛在危害的微生物；三級適用于首要經(jīng)過呼吸途徑使人傳染上嚴峻的甚至是致死疾病的致病微生物或其毒素；四級適用于對人體具有高度的風險性，經(jīng)過氣溶膠途徑傳達或傳達途徑不明、尚無有效疫苗或醫(yī)治辦法的致病微生物或其毒素。
20世紀80時代，為了研討流行性出血熱病毒的傳達機制，我國修建了第一個P3實驗室。2003年爆發(fā)的SARS疫情，是我國高等級生物安全實驗室展開的一個分水嶺。SARS爆發(fā)后，我國發(fā)布了國家生物安全實驗室制作系統(tǒng)規(guī)劃。一批P3實驗室投入工作，并建成了P4實驗室。
2015年1月31日，我國首個P4實驗室、中科院武漢國家生物安全實驗室在武漢竣工。2018年1月4日，實驗室經(jīng)過國家衛(wèi)計委（現(xiàn)國家衛(wèi)健委）高致病性病原微生物實驗活動現(xiàn)場評估，成為我國甚至亞洲首個正式投入工作的P4實驗室。
其時，全球的P4實驗室制作正呈現(xiàn)超速展開的趨勢。這與全球化時代的烈性流行癥風險有關(guān)，也與國家生物安全戰(zhàn)略有關(guān)。據(jù)不完全統(tǒng)計，全球已知有22個國家和地區(qū)的60個組織具有P4實驗室。但由于P4實驗室相關(guān)內(nèi)容觸及國家生物安全中心機密，所以一些國家并未揭穿數(shù)據(jù)。
經(jīng)過這些年的展開，現(xiàn)在我國已有幾十家P3、P4實驗室，為我國烈性與嚴重流行癥防控、生物防備和產(chǎn)業(yè)展開作出了重要貢獻。
來源：科技日報
