高效液相色譜（2）-島津LC-15C液相色譜儀操作規(guī)程
1、操作前的準備
1.1 流動相的配制：用高純度的試劑配制流動相，必要時照紫外分光光度法進行溶劑檢查，應符合要求；水應為新鮮制備的高純水，可用超級純水器制得或用重蒸餾水。對規(guī)定pH值的流動相，應使用精密pH計進行調節(jié)。配制好的流動相應通過0.45μm適宜的濾膜濾過，用前脫氣。應配制足量的流動相及時待用。
1.2 供試溶液的配制：供試品用規(guī)定溶劑配制成供試溶液。供試溶液在注入色譜儀前，一般應經(jīng)0.45μm或適宜的濾膜濾過。必要時，在配制供試溶液前，樣品需經(jīng)提取凈化，以免對色譜系統(tǒng)產(chǎn)生污染。
1.3 檢查上次使用記錄和儀器狀態(tài)：檢查色譜柱是否適用于本次試驗，色譜柱進出口位置是否與流動相的流向一致，原保存溶劑與現(xiàn)用流動相能否互溶，流動相的pH值與該色譜柱是否相適應，儀器是否完好，儀器的各開關位置是否處于關斷的位置。
2、儀器組成、電源
2.1 儀器組成：LC-15C液相色譜泵、SPD-15C紫外-可見檢測器、LCsolution 15c色譜工作站。
2.2 接通電源：將各儀器電源插頭插入插座內，打開泵（該儀器除梯度外可用單泵也可同時用雙泵，用單泵可僅開一個泵，用雙泵需兩個泵同時打開）。
3、操作
3.1 泵系統(tǒng)
3.1.1 單泵操作：
3.1.1.1 打開泵和檢測器電源，儀器由紅燈轉換為綠燈，更換所需的流動相，然后將排液閥旋鈕逆時針旋轉180°以打開排液閥。
3.1.1.2 按“purge”鍵運行，開始沖洗。如果排液閥旋鈕旋轉的度數(shù)超過180°，任何排出的流動相都可能包含氣泡。這是正?，F(xiàn)象。
3.1.1.3 清洗完成后，以順時針方向盡量旋轉排液閥旋鈕，關閉排液閥。
3.1.1.4 按下“pump”鍵，開始泵的運行。
3.1.2雙泵操作：
3.1.2.1 打開兩個泵和檢測器電源，儀器由紅燈轉換為綠燈，更換雙泵所需的流動相，然后將兩泵排液閥旋鈕逆時針旋轉180°以打開排液閥。
3.1.2.2 分別按“purge” 鍵運行，開始沖洗。
3.1.2.3 清洗完成后，以順時針方向盡量旋轉排液閥旋鈕，關閉排液閥。
3.1.2.4 分別按下“pump”鍵，開始兩個泵的運行。
3.2工作站的使用
3.2.1 雙擊桌面【Lcsolution 15c】圖標，確認已經(jīng)開啟LC系統(tǒng)后，啟動【LC實時分析”工作站。啟動【LC實時分析】工作站后，確保分析儀器的所有單元（泵、柱溫箱和檢測器）都已連至系統(tǒng)控制器。確保所有單元上都沒有顯示任何錯誤消息。
3.2.2 設置系統(tǒng)配置，以便該系統(tǒng)與儀器的實際配置相匹配。僅當?shù)谝淮?/span>將LCsolution 15c連接到分析儀器，或儀器的配置發(fā)生變化時，才需要下列設置。如果儀器的配置沒有任何變化，點擊“視圖”里的助手欄，點系統(tǒng)配置用單泵或雙泵進行運行。
3.2.3 設置儀器參數(shù)：
3.2.3.1 點【文件】項下【新建方法文件】，單擊“儀器參數(shù)視圖”下【正常】選項，可以在其中輸入分析條件，例如LC停止時間、泵A流速、檢測器A波長通道等。確保為每一檢測器設置了【LC停止時間】【結束時間】。
3.2.3.2 【LC停止時間】是控制儀器的持續(xù)時間。如果時間程序或餾分收集時間程序都沒有設置，則將其保留為0.01min。
3.2.3.3 如用單泵運行，泵【模式】鉤選“等濃度洗脫”（雙泵運行勾選“二元高壓梯度洗脫”），點【高級】選項卡中“泵”選項，設置泵A流速（一般為1.000ml/min）和壓力限制最大值、最小值。
3.2.3.4 如需雙泵（如梯度洗脫等），點【LC時間程序】設置梯度洗脫表，單擊“下載”將設置傳輸?shù)絻x器，使用新名稱保存方法文件。
3.2.4 設置進樣信息：確保顯示【就緒】，且【色譜圖視圖】中的基線穩(wěn)定后（一般約需15～30分鐘）。單擊【LC實時分析】窗口助手欄上的“單次運行”圖標，出現(xiàn)“單次運行”屏幕，設置樣品名、樣品ID、數(shù)據(jù)文件、數(shù)據(jù)描述、進樣體積等，然后單擊【確定】。
3.2.4. 檢測器調零：點擊“檢測器A零點”圖標，使檢測器數(shù)值調零。
3.2.5 進樣：吸取不少于60μl的樣品，放在進樣口，向左打開進樣閥，將樣品全部打入進樣口，向右打下進樣閥，系統(tǒng)即自動開始采集數(shù)據(jù)。單次分析開始，并且【LC實時分析】窗口中的狀態(tài)從【就緒】變?yōu)椤具\行】。當達到【儀器參數(shù)視圖】中指定的檢測器的【結束時間】時，自動終止數(shù)據(jù)采集。如設定的【結束時間】要修改，可以單擊【采集】助手欄中的【停止】圖標，也可以在【數(shù)據(jù)采集】菜單的【更改分析時間】項目中，在數(shù)據(jù)采集過程更改結束時間。一旦開始數(shù)據(jù)采集，【儀器參數(shù)視圖】設置變?yōu)橹蛔x，并且不能在【儀器參數(shù)視圖】中更改結束時間。
3.2.6 數(shù)據(jù)處理：
3.2.6.1 單擊“Lcsolution 15c”中的“再解析”，“LC再解析”開始。
3.2.6.2 選擇【文件】菜單中的“選擇項目文件夾”，然后選擇預測定的數(shù)據(jù)文件，數(shù)據(jù)文件即打開。
3.2.6.3 單擊助手欄中的【向導】圖標，單擊“program”點擊【下一步】，設置正確的積分參數(shù)。
3.2.6.4 記錄要識別的峰的保留時間，單擊【下一步】輸入所需峰的詳細內容，然后單擊【完成】。單擊化合物表右上角【視圖】按鈕，查看【結果】。
3.2.6.5 單擊【LC數(shù)據(jù)】助手欄中的【應用到方法】圖標，出現(xiàn)屏幕，提示指定方法文件名。命名方法文件并單擊【保存】。
3.2.7 重復3.2.4～3.2.6操作進行下一次測定，直到檢驗結束。
3.2.8 打印報告：在【LC數(shù)據(jù)分析】點擊左下角的【報告格式】出現(xiàn)“操作人”名，選定“操作人”雙擊。然后點擊左下角【數(shù)據(jù)】，從【數(shù)據(jù)】中拖動【數(shù)據(jù)文件】進行打印報告。
3.2.9清洗和關機
3.2.9.1分析完畢后，先關色譜工作站和檢測器，再用適當經(jīng)濾過和脫氣的溶劑清洗色譜系統(tǒng)，一般用先用25～30%甲醇沖洗，然后用純甲醇沖洗，25～30%甲醇一般沖洗15～30分鐘，純甲醇沖洗不得少于30分鐘，特殊情況應延長沖洗時間。
3.2.9.2關斷電源，作好使用登記，內容包括日期，檢品，儀器完好狀態(tài)等。 4注意事項
4.1色譜柱與進樣器及其出口端與檢測器之間應為無死體積連接，以免試樣擴散影響分離。
4.2新柱或被污染柱用適當溶劑沖洗時，應將其出口端與檢測器脫開，避免污染。
4.3壓力表無壓力顯示或壓力波動時不能進行分析，應檢查泵中氣泡是否已排除，各連接處有無漏液，排除故障后方能進行操作。如壓力升高，甚至自動停泵，應檢查柱端有無污染堵塞。
4.4發(fā)現(xiàn)記錄基線波動，出現(xiàn)毛刺等現(xiàn)象，首先應檢查檢測器流通池是否有氣泡或污染，如不是流通池引起，儀器穩(wěn)定后方能進行操作。
4.5進樣時，色譜柱應用流動相充分沖洗平衡，如系統(tǒng)適用性并不符合規(guī)定，或填充劑已損壞，則應更換新的同類色譜柱進行分析。如果同類色譜柱依法操作達不到預定的分離時，可更換另一牌號的同類色譜柱進行試驗。
4.6以硅膠作載體的化學鍵合相填充劑，其穩(wěn)定性受pH值影響很大。所以流動相一般pH應為2.5～7.5。如果使用高pH值流動相時，可在泵與進樣器之間連接一硅膠短柱，以飽和流動相，保護分析柱，并盡可能縮短在高pH值下的使用時間，用后立即沖洗。
4.7色譜儀管路系統(tǒng)，從泵、進樣器、色譜柱至檢測器流通池，在分析完畢后，均應按要求充分沖洗，特別是用過含鹽流動相的，更應注意先用水沖洗數(shù)分鐘，再用不同濃度的甲醇-水依次充分沖洗。
4.8如發(fā)現(xiàn)泵漏液、壓力不正常等較嚴重的情況，應請有經(jīng)驗的維修人員進行檢查，必要時聯(lián)系專業(yè)技術人員進行維修。儀器嚴禁帶“病”工作。
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