高效液相色譜（1）-Agilent 1200高效液相色譜儀標(biāo)準(zhǔn)操作程序
1. 目的
使操作人員的操作步驟規(guī)范化。
2. 適用范圍
適用于儀器安裝、調(diào)試、校準(zhǔn)后正常狀態(tài)下進(jìn)行的操作。
3. 責(zé)任者
質(zhì)控科儀器分析員對(duì)此規(guī)程負(fù)責(zé)。
4. 規(guī)程
4.1清洗液、流動(dòng)相、封柱液預(yù)處理
4.1.1所有清洗液、流動(dòng)相、封柱液在使用前均需過(guò)濾、脫氣以及混合均勻。
4.1.2甲醇-水（10：90）、乙腈-水（10：90）、超凈水、乙腈均需存放在棕色溶劑瓶中。
4.1.3含有乙腈的溶液以及不含乙腈但含有較高比例的其他有機(jī)溶劑的溶液在過(guò)濾時(shí)需使用有機(jī)相微孔濾膜，其它溶液在過(guò)濾時(shí)需使用水相微孔濾膜。
4.1.4存放清洗液、流動(dòng)相、封柱液的溶劑瓶在每次裝入溶液前需用少量過(guò)濾好的該溶液清洗數(shù)次。
4.2接通電源,開(kāi)啟連機(jī)電腦,再接通儀器電源,儀器自檢完畢，處于準(zhǔn)備進(jìn)行狀態(tài)。雙擊桌面圖標(biāo)“儀器1聯(lián)機(jī)”，打開(kāi)Agilent 1200化學(xué)工作站，在左上角下拉框中選擇“方法與運(yùn)行控制”界面。顯示如下圖標(biāo)：
注意：一定要先雙擊“儀器1聯(lián)機(jī)”圖標(biāo)，進(jìn)入聯(lián)機(jī)狀態(tài)，方可雙擊“儀器1脫機(jī)”圖標(biāo)，同時(shí)進(jìn)入脫機(jī)界面。否則，將無(wú)法聯(lián)機(jī)。
4.2泵
4.2.1 準(zhǔn)備清洗液并裝入溶劑瓶中，將吸濾器放入瓶?jī)?nèi)。安裝所需用柱子。
4.2.3 將吹掃閥（即“Purge”閥）打開(kāi)，單擊泵圖標(biāo) ，選擇“設(shè)置泵”，將“流速”設(shè)置為3.00ml/min。選擇清洗液所在通道（建議為A通道），單擊“確定”，在“系統(tǒng)視圖”中單擊“啟動(dòng)”運(yùn)行泵，泵運(yùn)行10分鐘后，觀察壓力，應(yīng)小于10bar，若大于此壓力，應(yīng)更換purge閥濾芯，調(diào)節(jié)流速1.00ml/min。
4.2.4關(guān)閉purge閥，觀察柱壓是否正常。
4.2.5選擇“控制”，在“用于泵密封墊清洗的泵”（Seal Wash）中選擇“定期清洗”，“周期”設(shè)置為5min，“持續(xù)”設(shè)置為0.1min，同時(shí)觀察試劑架中10%異丙醇是否充足，相應(yīng)的廢液瓶是否有充足空間。
4.2.6 根據(jù)“柱使用記錄中所規(guī)定的方法”清洗柱子約30分鐘后，在“控制”組中的“泵”選項(xiàng)中選擇“待機(jī)”，待系統(tǒng)壓力降到10bar以下后，更換流動(dòng)相，在“控制”組中的“泵”選項(xiàng)中選擇“啟動(dòng)”改用流動(dòng)相平衡柱子，約30分鐘后柱子處于平衡狀態(tài)。設(shè)定所需流速，在“停止時(shí)間”中設(shè)定所需運(yùn)行時(shí)間，在“后運(yùn)行時(shí)間”設(shè)定所需后運(yùn)行時(shí)間；選擇“溶劑”項(xiàng)，設(shè)定各通道比例，單擊“確定”。
4.2.7 如進(jìn)行梯度分析，在“設(shè)置泵”組中選擇“時(shí)間表”，單擊“追加”，根據(jù)具體方法進(jìn)行時(shí)間和相應(yīng)的參數(shù)設(shè)置
4.3 柱溫箱4.3.1在系統(tǒng)視圖中，單擊柱溫箱圖標(biāo)，并從菜單中選擇“設(shè)置柱溫箱”，設(shè)置“溫度”選項(xiàng)，單擊“確定”。
4.3.2在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)，用清洗液清洗柱子時(shí)，應(yīng)同時(shí)開(kāi)啟柱溫箱；在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，用清洗液清洗柱子時(shí)，應(yīng)關(guān)閉柱溫箱，讓柱子隨著清洗過(guò)程慢慢冷卻。要避免到封柱過(guò)程結(jié)束后才關(guān)閉柱溫箱，這會(huì)導(dǎo)致柱的壽命減短。
4.4自動(dòng)進(jìn)樣器4.4.1在系統(tǒng)視圖中，單擊自動(dòng)進(jìn)樣器圖標(biāo)，從菜單“設(shè)置進(jìn)樣器”，在“進(jìn)樣”組中，選擇“洗針進(jìn)樣”，清洗瓶通常設(shè)為“91”；在最優(yōu)化中設(shè)為“無(wú)”。
4.4.2 清洗瓶中的清洗劑通常為濾過(guò)的超凈水，只需蓋瓶蓋，無(wú)需放置墊片。
4.5可變波長(zhǎng)檢測(cè)器（VWD）
4.5.1在系統(tǒng)視圖中，單擊檢測(cè)器圖標(biāo)，并從菜單中選擇“設(shè)置VWD信號(hào)”，在“信號(hào)”組中設(shè)置波長(zhǎng)，在“峰寬（響應(yīng)時(shí)間）”組中，單擊下拉列表并選擇“>0.1min（2s）”，單擊“確定”。
4.5.2在“控制”組中，選擇關(guān)閉或打開(kāi)氘燈。一般情況下，待到系統(tǒng)走流動(dòng)相時(shí)即打開(kāi)氘燈預(yù)熱；分析結(jié)束時(shí)，用清洗液清洗柱子時(shí)，即時(shí)關(guān)閉氘燈。
4.6“自動(dòng)進(jìn)樣器”、“柱溫箱”、“檢測(cè)器”中的時(shí)間表設(shè)置均與“泵”一致。
4.7 上述“自動(dòng)進(jìn)樣器”、“泵”、“柱溫箱”、“檢測(cè)器”的相關(guān)參數(shù)設(shè)置完畢后可在主界面選擇“方法”，選擇“方法另存為”保存方法，以后使用時(shí)可選擇“調(diào)用方法”。
4.8 序列
4.8.1在“方法和運(yùn)行控制”視圖中，單擊主工具欄上的，切換至“序列”面板，點(diǎn)擊“儀器控制”。
4.8.2單擊選擇“序列參數(shù)”出現(xiàn)如下對(duì)話框：
“操作者姓名”一般填寫(xiě)姓名的首字母集合；“數(shù)據(jù)文件”選擇“自動(dòng)”；子目錄填寫(xiě)“xxyyzz-aaa”，其中xxyyzz為6位數(shù)的年月日組合，aaa為品名的首字母集合；“運(yùn)行部分方法”選擇“依據(jù)運(yùn)行時(shí)選項(xiàng)表”；“等待時(shí)間”設(shè)置為0min；“未就緒超時(shí)”設(shè)置為0min；如該序列要走過(guò)夜，在“關(guān)閉”選擇“序列運(yùn)行后命令/宏”，如果所用的儀器為單元泵，選擇“LAMPALL OFF”,如果所用的儀器為四元泵，選擇“macro SHUTDOWN MAC,go”
4.9.3單擊“確定”。
4.9.4單擊“序列“面板，出現(xiàn)如下對(duì)話框，設(shè)定序列表。
在“樣品瓶“中輸入樣品瓶位置“1～99”；在樣品樣品名稱中輸入相應(yīng)樣品名稱，具體參見(jiàn)附件一；在方法名稱中輸入相應(yīng)的方法名稱，具體參見(jiàn)附件二；在“進(jìn)樣次數(shù)/瓶”輸入所需進(jìn)樣的次數(shù)；使用“插入”、“追加一行”和“剪切”按鈕編輯序列行數(shù)，單擊“確定”。
4.9.5單擊主界面上的“序列”，選擇“保存序列”，保存所設(shè)置的序列。
4.10 數(shù)據(jù)分析
4.10.1在“視圖”中選擇“數(shù)據(jù)分析”將主界面切換到數(shù)據(jù)分析。
4.10.2單擊，切換至積分工作區(qū)。
4.10.3選擇“調(diào)用信號(hào)”調(diào)用所需的信號(hào)。
4.10.4在“積分/報(bào)告”工具欄中，單擊切換到積分事件表。其中，基線校正可以設(shè)置為“經(jīng)典”或“高級(jí)”，在進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)分析時(shí)設(shè)置為“高級(jí)”；斜率靈敏度在有關(guān)物質(zhì)分析時(shí)設(shè)置為“0.5”，其他分析時(shí)設(shè)置為“1”；峰寬設(shè)置為“0.04”；“最小峰面積”和“最小峰高”在有關(guān)物質(zhì)分析時(shí)均設(shè)置為“0”，其他分析時(shí)可設(shè)置適合的數(shù)值；“肩峰”選擇“關(guān)閉”；“ 信號(hào)指定事件”選擇“VWD缺省”。單擊保存已修改的積分事件表并關(guān)閉積分工作區(qū)。
4.10.5單擊打開(kāi)“保存方法”對(duì)話框保存方法。
4.10.6單擊放大光標(biāo)查看積分基線，單擊縮小至初始大小。
4.11樣品分析
待基線走平穩(wěn)后，在序列“儀器控制”主界面點(diǎn)擊“開(kāi)始”進(jìn)樣。
4.12儀器及柱子清洗
根據(jù)“柱使用記錄中所規(guī)定的方法”清洗柱子及流路，注意一般甲醇-水（10：90）、乙腈-水（10：90）不超過(guò)60分鐘。再用10倍柱體積封柱液清洗柱子及流路。退出工作軟件并保存數(shù)據(jù)，關(guān)機(jī)。
5. 維護(hù)
5.1泵
5.1.1主動(dòng)入口閥濾芯，每6個(gè)月清洗一次。
5.1.2溶劑過(guò)濾器，每3個(gè)月清洗一次。
5.1.3 泵密封墊、柱塞桿每2年清洗一次。
5.2自動(dòng)進(jìn)樣器
5.2.1針頭，每6個(gè)月清洗一次。
5.2.2針座，每6個(gè)月清洗一次。
5.2.3轉(zhuǎn)子密封墊，每6個(gè)月清洗一次。
5.2.4 計(jì)量泵，通常不進(jìn)行維護(hù)，除非發(fā)現(xiàn)進(jìn)樣量精密度降低或計(jì)量設(shè)備泄漏。
5.3柱溫箱，進(jìn)行必要的清潔。
5.4 檢測(cè)器
5.4.1 氘燈，當(dāng)不能點(diǎn)亮或者漂移超過(guò)范圍是更換。
5.4.2 流通池，噪聲、滲漏、光強(qiáng)度降低時(shí)進(jìn)行清洗。
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