高效液相色譜（1）-Agilent1100HPLC的正確使用和科學(xué)保養(yǎng)
HPLC的正確使用和科學(xué)保養(yǎng)
1、保持貯液瓶清潔，對(duì)專用貯液瓶應(yīng)定期清洗；用試劑瓶作貯液瓶時(shí)，要經(jīng)常更換。
2、定期（如半個(gè)月）在稀硝酸溶液中超聲、清洗過濾器，保持過濾器暢通無阻。
3、使用HPLC試劑和新蒸二次蒸餾水作流動(dòng)相，所使用的溶劑其截止波長一定要低于檢測(cè)波長，對(duì)不是HPLC級(jí)的試劑要進(jìn)行過濾（HPLC試劑出廠前已用0.02μm濾膜過濾）。對(duì)流動(dòng)相一定要脫氣。
4、每天開始使用儀器，注意放空排氣，確保泵頭、流動(dòng)池以及其它流路系統(tǒng)中無氣泡存在。
5、珍惜保護(hù)色譜柱，避免柱頭突然產(chǎn)生大的波動(dòng)，擾動(dòng)損傷柱床。如避免泵啟動(dòng)過速、升壓過快、樣品閥搬動(dòng)過慢所造成的柱壓大的波動(dòng)。
6、采用保護(hù)（警戒）柱，延長柱壽命。如污染物堆積于保護(hù)柱柱頭，造成柱壓升高，柱效下降，峰形變差時(shí)，卸下用強(qiáng)溶劑反沖后再用或更換新保護(hù)柱。
7、避免超負(fù)荷進(jìn)樣，對(duì)250×4.6mm的柱子,絕對(duì)進(jìn)樣量應(yīng)不超過100μg。在靈敏度允許的前提下，應(yīng)盡量將試樣濃度降低，減少絕對(duì)進(jìn)樣量（進(jìn)樣體積可保持不變），這是保持HPLC柱性能持久良好的重要舉措之一。
8、經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗柱子，將柱內(nèi)強(qiáng)保留組分及時(shí)洗脫出。反相柱用異丙醇--二氯甲烷（1：1）沖洗，正相（硅膠柱）用純甲醇或異丙醇沖洗，時(shí)間均不少于1h。
9、做完試驗(yàn)，及時(shí)用適當(dāng)溶劑沖洗柱子和進(jìn)樣閥，尤其是對(duì)過夜的柱子和進(jìn)樣閥，一定要用足量的水徹底洗凈其中的鹽類、緩沖液，再用甲醇或乙腈沖洗，并保存在乙腈中。正相柱保存在非極性有機(jī)溶劑（如己烷）中。
10、以硅膠為基質(zhì)的柱子，如C-18、C-8等，要控制好流動(dòng)相的pH值，一般不要低于2.5，不高于7.0。
11、盡量用流動(dòng)相溶解樣品，一是避免出現(xiàn)拖尾峰、怪峰，二是避免試樣在系統(tǒng)中由于溶解度降低而析出。
12、對(duì)于阻塞或受傷嚴(yán)重的柱子，必要時(shí)，可卸下不銹鋼濾板，超聲洗去濾板阻塞物，對(duì)塌陷污染的柱床進(jìn)行清除、填充、修補(bǔ)工作，此舉可使柱效恢復(fù)到一定程度（80%），有繼續(xù)使用的價(jià)值。
13、色譜儀檢測(cè)器輸出與積分儀（處理機(jī)）要匹配，要合理設(shè)置參數(shù)如斜率、半峰寬、閾值、AUFS值、衰減等。將適宜的進(jìn)樣量和合適的參數(shù)結(jié)合起來，使主峰峰高達(dá)到記錄儀滿量程的80%左右。
14、用HPLC分析酸堿性物質(zhì)，由于吸附作用（次級(jí)保留）使峰開拖尾。加入改良劑可以大大改善峰形，提高積分的準(zhǔn)確度。一般規(guī)則是：（1）分析酸性物質(zhì)，可加入1%有醋酸。（2）分析堿性物質(zhì)，10-20mmol/L三乙胺。（3）酸堿物質(zhì)混為一體，可同時(shí)加入1%的醋酸和10-20mmol/L三乙胺
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