酶標(biāo)儀的兩種分類及選購指南
酶標(biāo)儀的兩種分類
多功能酶標(biāo)儀是實(shí)驗(yàn)室常用的一種儀器，酶標(biāo)儀的分類方式一般可以按照濾光方式的不同和功能的不同進(jìn)行劃分。
一、酶標(biāo)儀基于濾光方式的不同可分為濾光片式的酶標(biāo)儀和光柵式酶標(biāo)儀。
多功能酶標(biāo)儀濾光片式酶標(biāo)儀采用濾光片來進(jìn)行波長的選擇，酶標(biāo)儀內(nèi)置濾光片輪，可選擇試驗(yàn)所需的不同波長的濾光片來進(jìn)行分光，光源發(fā)出的全波譜光經(jīng)過濾光片后，大部分被過濾，只剩下濾光片本身允許的波長通過，這樣就可就通過濾光片來獲得特定的波長。濾光片輪一般包含4-6塊濾光片，通過選擇不同的濾光片可獲得不同的波長，但是獲得的波長都是固定的，受到一定的限制，不能獲得任意所需的波長，而且更換濾光片價(jià)格比較昂貴。
一般波長固定的濾光片有405，450，490，630NM。光柵式酶標(biāo)儀雖然才出現(xiàn)短短十年，但是發(fā)展非常迅猛，現(xiàn)在已經(jīng)是主流的酶標(biāo)儀。它采用光柵進(jìn)行分光，光源發(fā)出的全波譜光線經(jīng)過光柵后，通過光柵上面分布的一系列狹縫的分光，就可以獲得任意波長的光，波長連續(xù)可調(diào)，一般遞增量為1nm.光柵式酶標(biāo)儀使用方便靈活，可以通過軟件選擇任意波長的光，而且可以進(jìn)行全波長的掃描，通過全波長掃描可以獲得未知樣品的吸收峰，從而可以達(dá)到檢測未知樣品的目的，在實(shí)驗(yàn)室中很受歡迎，可以進(jìn)行更多實(shí)驗(yàn)的檢測。因此目前在國內(nèi)的普及程度很高。
二、按照功能的劃分，酶標(biāo)儀可以分為光吸收酶標(biāo)儀，熒光酶標(biāo)儀，化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀和多功能的酶標(biāo)儀。
光吸收酶標(biāo)儀是用來進(jìn)行可見光與紫外光吸光度的檢測。特定波長的光通過微孔板中的樣品后，光能量被吸收，而被吸收的光能量與樣品的濃度呈一定的比例關(guān)系，由此可以用來定性和定量的檢測。光吸收的檢測技術(shù)成熟，成本低，操作簡單，但是動(dòng)態(tài)范圍窄，靈敏度比較低，特異性不強(qiáng)。一般可見光和紫外光分別采用鎢燈及氘燈作為光源，而紫外/可見酶標(biāo)儀是可以將兩種光源進(jìn)行切換，適應(yīng)不同測量波長的需求。熒光酶標(biāo)儀是用來進(jìn)行熒光的檢測。通過激發(fā)光柵分光后的特定波長的光照射到被熒光物質(zhì)標(biāo)定的樣品上后，會(huì)發(fā)出波長更長的發(fā)射光，通過發(fā)射光柵后到達(dá)檢測器。熒光的強(qiáng)度與樣品的濃度呈一定的比例。熒光檢測靈敏度高，可實(shí)時(shí)檢測，使用方便，檢測模式多樣，但是容易受外界干擾，激發(fā)光與發(fā)射光容易互相影響，干擾檢測。
化學(xué)發(fā)光是來自生物化學(xué)反應(yīng)中的自發(fā)光，可分為輝光型和閃光型兩種類型。輝光型發(fā)光持久，穩(wěn)定，能持續(xù)一段時(shí)間;閃光型發(fā)光時(shí)間短，變化快，穩(wěn)定性不強(qiáng)，需要應(yīng)用自動(dòng)加樣器才可以進(jìn)行?；瘜W(xué)發(fā)光中發(fā)出的光子數(shù)與樣品量呈一定比例關(guān)系，化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀靈敏度非常高，動(dòng)力學(xué)范圍廣。
酶標(biāo)儀選購指南
作為微孔板比色計(jì)的酶標(biāo)儀，其基本功能不外乎一個(gè)比色測定，所不同的是在測定波長范圍、吸光度范圍、光學(xué)系統(tǒng)、檢測速度、震板功能、溫度控制等方面的差異。
1.1 測定波長
一般酶標(biāo)儀的測定波長在400~750nm或800nm之間，完全可以滿足ELISA的顯色測定。目前國內(nèi)常見的ELISA試劑盒所使用的標(biāo)記用酶均為辣根過氧化物酶（HRP），底物通常為四甲基聯(lián)苯胺（TMB）和鄰苯二胺（OPD），其在過氧化氫溶液的存在下，經(jīng)HRP作用，分別氧化為2,2,-二氨基偶氮苯（DAB）和聯(lián)苯醌。當(dāng)pH值為5.0左右時(shí)，DAB在450nm波長處有zui大吸收，當(dāng)pH值降為L 0時(shí)，zui大吸收波長移至492nm,同時(shí)摩爾消光系數(shù)變大，顯色加深，因而常用強(qiáng)酸如硫酸或鹽酸終止反應(yīng)。TMB的氧化產(chǎn)物聯(lián)苯醌在波長450nm處有zui大消光系數(shù)，如果HRP量少，H:O:和TMB過量時(shí)，則形成藍(lán)色的陽離子根。降低pH,即可使藍(lán)色的陽離子根轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色的聯(lián)苯醌，使用硫酸作為終止劑可使產(chǎn)物穩(wěn)定90min.因此，450nm和492nm兩個(gè)波長是目前ELISA測定zui常用的。各種酶標(biāo)儀都配有放置濾光片的可自動(dòng)轉(zhuǎn)換的部件，可以同時(shí)安裝6~8片濾光片，所配備的濾光片均應(yīng)包括上述兩個(gè)波長，有的酶標(biāo)儀以490nm濾光片替代492nm濾光片，影響不大。除了這兩個(gè)基本濾光片外，考慮到雙波長比色的需要，還應(yīng)有620nm或630nm或650nm和405nm波長的濾光片，其他濾光片可根據(jù)需要選擇。有時(shí)，有的實(shí)驗(yàn)室希望用酶標(biāo)儀作微量生化測定，故酶標(biāo)儀生產(chǎn)廠家對(duì)其生產(chǎn)的酶標(biāo)儀擴(kuò)展了紫外檢測功能，此時(shí)需要一個(gè)340nm波長濾光片。此時(shí)，酶標(biāo)儀的測定波長范圍就成為340-750nm或800nm。
1.2 測定的吸光度范圍
通常，酶標(biāo)儀的吸光度測定范圍在。0-4之間即可以滿足ELISA的測定要求。在0-4.0范圍，線性誤差不超過±2.0%，在0.3-3.0吸光度范圍內(nèi)，測定精密度CV小于±0.2%；3.0-4.0Abs范圍內(nèi)，測定精密度CV小于士0.2%。因此，對(duì)于酶標(biāo)儀的吸光度范圍不必去刻意追求大的吸光度范圍，主要看看在一定的吸光度范圍內(nèi)的線性和精密度如何。
1.3 光學(xué)系統(tǒng)
酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)采用的是垂直光路多通道（通常為8或12通道，亦有單通道）檢測，一般為硅光管或光導(dǎo)纖維，除測定通道外，有的酶標(biāo)儀還有一個(gè)參比通道，每次測定可進(jìn)行自我校準(zhǔn)。酶標(biāo)儀的光學(xué)系統(tǒng)功能如何，均可通過酶標(biāo)儀測定的吸光度范圍、線性度、精密度和準(zhǔn)確度等體現(xiàn)出來。光學(xué)系統(tǒng)好的話，則上述指標(biāo)也應(yīng)較佳。測定的精密度與測定通道之間的均一性有直接關(guān)系。單通道可避免因通道不同所致的差異。
1.4 檢測速度
酶標(biāo)儀的檢測速度是指其完成比色測定所需的時(shí)間。檢測速度快，有利于提高檢測的精密度，即避免由于測定過程中，因測定時(shí)間不同所致的各微孔間吸光度間的差異。目前市場上常見的酶標(biāo)儀檢測速度都非?？?，通常在數(shù)秒鐘內(nèi)。
1.5 震板功能
酶標(biāo)儀的震板功能是指酶標(biāo)儀在對(duì)ELISA板孔進(jìn)行比色測定前對(duì)其進(jìn)行振蕩混勻，使板孔內(nèi)顏色均一。目前市場上常見的酶標(biāo)儀均有震板功能，所不同的是震板方式，有的可按上下、左右或旋轉(zhuǎn)等方式及振蕩幅度等任意調(diào)節(jié)。
1.6 溫育功能
溫育功能是指酶標(biāo)儀本身能按要求自動(dòng)地控制儀器內(nèi)部的溫度，使得ELISA測定中微孔板條的溫育過程可在儀器內(nèi)部完成，而無需再外配溫箱。目前，只有少部分酶標(biāo)儀具有此種功能，溫育功能只是酶標(biāo)儀的一個(gè)附加功能，是否具有并不能說明酶標(biāo)儀檔次的高低及儀器的優(yōu)劣。作為實(shí)驗(yàn)室是否選擇，則可根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的條件及需要來決定。
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