【實驗猿】戴安Dionx U-3000高效液相色譜儀操作規(guī)程
一、操作前準(zhǔn)備：
1.1流動相的配制： 戴安中國有限公司 液相色譜操作規(guī)程-U3000
1.1.1根據(jù)所供試品的性質(zhì)、相關(guān)的文獻資料、工作經(jīng)驗等按比例配制流動相。
1.1.2根據(jù)流動相的性質(zhì)確定采用有機膜（0.45um）還是水相膜(0.45um)對流動相進行過濾。
1.1.3將過濾后的流動相進行超聲脫氣10~15分鐘。
1.2對照品供試品處理：
1.2.1稱取或量取適量的對照品或供試品，用適當(dāng)?shù)娜軇ㄗ詈貌捎昧鲃酉嗷蛄鲃酉嗟闹鞒煞郑┻M行充分溶解（也可借助超聲波進行超聲溶解），使其濃度為0.1~1mg/mL（根據(jù)檢測結(jié)果再適當(dāng)調(diào)節(jié)溶液的濃度）。
1.2.2根據(jù)對照品或供試品的性質(zhì)確定采用有機針頭濾膜（0.45um）還是水相針頭濾膜(0.45um)進行過濾。
1.3色譜柱的選擇：根據(jù)樣品的性質(zhì)選擇適當(dāng)?shù)纳V柱。
二、開機：
2.1打開UPS（不間斷電源）電源，打開儀器接線板電源開關(guān)；
2.2打開電腦顯示器電源，打開電腦主機電源（POWER），啟動電腦；
2.3依次打開泵、自動進樣器、柱溫箱、檢測器的電源；
2.4選擇開始＞程序＞Chromeleon＞Sever Monitor或雙擊屏幕右下角快捷圖標(biāo),出現(xiàn)對話界面后點擊Ｓtart啟動,等Dongle序號出來以后（表示Sever Monitor程序運行正常）可以點擊Close來關(guān)閉界面。
2.5打開“開始”/“程序”/“Chromel”/“Chromeleon”或雙擊在桌面上的Chromeleon圖標(biāo)（工作站主程序）打開 HPLC軟件系統(tǒng)主界面。
2.6 在左窗口中單擊根目錄，此時會在右邊的窗口中出現(xiàn)一個“hplc.pan”文件，雙擊此文件打開HPLC控制面板程序。
2.7 在控制面板“Pump”控制框中選中“connect”選框，Purge流路中氣泡，設(shè)置總流速為適當(dāng)?shù)臄?shù)值（建議要由0.2ml/min逐漸增加到適當(dāng) 的流速）后并按回車鍵（“Enter”）以示確定。此時泵自動會以設(shè)置的流速進行運行。若是多元梯度泵可以分別設(shè)置B、C、D等流動相的流速所占總流速的比例。
2.8在控制面板“自動進樣器”控制框中，點擊“注滿注射器”按鈕，排除注射器中的氣泡。
2.9在控制面板“柱溫箱”控制框中，設(shè)置準(zhǔn)備分析樣品所使用的柱溫箱溫度。
三、樣品分析：
3.1建立新程序：
3.2建立方法：
3.3建立樣品表：
3.4打開氘燈（待系統(tǒng)壓力穩(wěn)定后約20min后再開燈）：在控制面板“Detector”控制框中，選中“l(fā)amp on”選框，打開紫外檢測器的氘燈。
3.5查看基線：在氘燈打開10分鐘后，點擊“
”設(shè)置所要查看波長，點擊確定。
3.6關(guān)閉基線：待基線穩(wěn)定后，點擊“ ”，點擊確定，關(guān)閉查看基線。
3.7啟動樣品表進行分析：
3.8自動進樣器便開始自動進樣分析。
3.9樣品全部檢測結(jié)束后，如果不再分析樣品應(yīng)立即關(guān)掉氘燈，延長氘燈使用的壽命
四、數(shù)據(jù)處理：
4.1處理標(biāo)準(zhǔn)曲線；
4.2打印標(biāo)準(zhǔn)曲線；
4.3打印樣品報告。
五、關(guān)機：
5.1沖洗并保存色譜柱及系統(tǒng)。
5.2關(guān)閉泵流速，檢測器氘燈，斷開連接，關(guān)閉工作站。
5.4關(guān)閉檢測器、柱溫箱、自動進樣器、泵的電源。
5.5關(guān)閉計算機。關(guān)閉UPS電源。
六、注意事項
6.1溶劑泵的使用注意事項：
（1） 使用時要留心防止溶劑瓶內(nèi)的流動相被用完，否則空泵運轉(zhuǎn)會磨損柱塞、缸體和密封環(huán)，最終產(chǎn)生漏夜。
（2） 防止任何固體微粒進入泵體，因為塵?；蚱渌魏坞s質(zhì)微粒都會磨損柱塞、密封環(huán)、
缸體和單向閥，因此應(yīng)預(yù)先除去流動相中的任何固體顆粒。流動相過濾，可采用濾膜（0.2um或0.45um）等濾過。
（3） 輸液泵的工作壓力不能超過規(guī)定的最高壓力，否則會使高壓密封環(huán)變形，產(chǎn)生漏夜。
（4） 流動相應(yīng)該先脫氣，以免在泵內(nèi)產(chǎn)生氣泡，影響流量的穩(wěn)定性，如果有大量的氣泡，泵就無法正常工作。
（5） 溶劑泵長期不用時，用甲醇以1.0ml/min沖洗各個通道。
（6） 泵的清洗液要勤換。
（7） 每次開啟泵之前要排除管道中是氣泡。
（8） 流動相由無機鹽溶液轉(zhuǎn)換有機溶劑前要用去離子水清洗管路。
（9） 轉(zhuǎn)換不同流動相時注意兩者是否容易混合或者發(fā)生反應(yīng)。
（10）長期不用或運輸前要到空清洗液瓶。
6.2色譜柱的使用注意事項：
（1） 免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進行，進樣閥的轉(zhuǎn)動不能過緩。
（2） 一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)廠家指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效。
（3） 選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時可以在進樣器前連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時，預(yù)柱為硅膠，可使流動相在進入分析之前被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被破壞。
（4） 避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對樣品進行預(yù)處理或者在進樣器和色譜柱之間連接一保護柱。保護柱一般是有相似固定相的短柱，也有用浸透限制固定相短柱。保護柱可以經(jīng)常更換。
（5） 保存色譜柱時應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。絕對禁止將緩沖液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時間。
6.3檢測器的使用注意事項：
（1） 長時間檢測池中無流動相流動時，關(guān)閉檢測器氘燈。
（2） 不要將物品或其他儀器檔住檢測器的散熱孔。
（3） 檢測器安裝的位置應(yīng)沒有震動，溫度變化不大，避免陽光直射。
（4） 在關(guān)燈命令發(fā)出后，再次開燈須等待5分鐘以上的時間。否則燈會因為過熱而損壞。
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